Identifikasi Gram Positif Cocci
Staphylococcus
Pendahuluan
Genus Staphylococcus mengandung Organisme patogen dan non-patogenik . Mereka tidak menghasilkan endospores tetapi sangat tahan terhadap pengeringan, terutama ketika dihubungkan dengan bahan organik seperti darah, nanah, dan cairan jaringan lain . Kebanyakan staphylococci ditemukan secara rutin pada permukaan kulit. Istirahat di kulit dan selaput lendir memungkinkan organisme ini masuk ke dalam tubuh di mana mereka dapat menyebabkan penyakit.
Tiga spesies utama meliputi Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, dan Staphylococcus saprophyticus. Dua terakhir jarang terlibat dalam penyakit, tetapi telah diisolasi dalam kasus endokarditis dan infeksi saluran kemih bawah pada keadaan tertentu. Staph. aureus dianggap sebagai galur patogenik, menyebabkan abses, bisul, carbuncles, jerawat dan impetigo. Kadang menyebabkan radang paru-paru, osteomielitis, endokarditis, Sistitis, pielonefritis, dan keracunan makanan . Ketiga jenis staphylococci dapat dibedakan satu sama lain oleh sejumlah tes biokimia.
Prinsip
Identifikasi organisme didasarkan pada karakteristik selular, kultur dan biokimia . Semua jenis Staphylococcus adalah cocci Gram positif. Pada nutrient agar mereka cenderung berwarna putih, koloni bulat, seluruh, cembung. Pada media Agar darah Staphylococcus aureus dapat menunjukkan hemolisis dari agar-agar di daerah sekitar koloni.
Tes biokimia tambahan yang berguna dalam memisahkan Staphylococcus spesies antara lain katalase, coagulase, pertumbuhan dan fermentasi garam manitol, dan resistensi atau kerentanan terhadap antibiotik novobiocin.
Tes katalase menentukan apakah organisme menghasilkan enzim katalase yang mengurai hidrogen peroksida menjadi air dan oksigen. 2 H 2 O 2 __catalase__ > 2 H 2 O + O 2
Enzim ini memungkinkan organisme untuk terbebas dari metabolit berbahaya hasil respirasi aerobik yang juga dapat dihasilkan oleh organisme aerobik dan anaerobik facultatively. Ada enzim lain yang dihasilkan beberapa organisme untuk menangani metabolit endproducts yang beracun sehingga tidak semua aerob atau anaerob fakultatif menghasilkan katalase.
Organisme patogen memiliki mekanisme untuk membantu mereka mengatasi mekanisme pertahanan tuan rumah. Satu contoh mekanisme perlindungan yang melibatkan lapisan sel-sel bakteri dalam tubuh host, seperti fibrin, untuk mengelabui sistem kekebalan tubuh host. Pelapisan dari zat tubuh alami ini tidak akan memicu respon imun. Enzim Coagulase menyebabkan pembentukan fibrin yang melindungi sel-sel bakteri.dari sistem immunitas host.
Beberapa organisme tidak dapat mentoleransi tekanan osmotik yang tinggi. Media yang mengandung konsentrasi garam lebih tinggi dari normal dapat menghambat pertumbuhan Organisme yang non-toleran garam Media agar garam manitol (manitol salt agar) mengandung konsentrasi garam yang tinggi sehingga hanya organisme yang toleran garam yang akan tumbuh di atasnya. Selain itu, manitol garam agar berisi gula manitol. Beberapa organisme dapat menggunakan manitol sebagai sumber makanan dan akan menghasilkan asam endproducts dari metabolisme ini. Karena proses ini tidak terlihat, maka indikator ditambahkan ke media untuk mendeteksi perubahan pH. Fenol merah adalah indikator yang digunakan dalam manitol garam agar. Berwarna merah pada pH netral tapi berubah menjadi kuning jika kondisi di media menjadi asam.
Kerentanan antibiotik adalah tes lain yang dapat digunakan untuk mengidentifikasi organisme. Sebuah kertas filter cakram yang diresapi dengan antibiotik, dalam hal ini novobiocin. Ketika disk
ditempatkan pada agar, antibiotik berdifusi melalui agar. Organisme yang rentan terhadap antibiotik tidak akan mampu tumbuh pada media yang mengandung antibiotik. Sebuah zona inhibisi (tidak ada pertumbuhan) akan terlihat di sekitar disk. Ukuran zona hambatan menunjukkan penolakan atau kerentanan organisme terhadap antibiotik.
Prosedur Uji Katalase
1. Tempatkan setetes 3% H 2 O 2 pada kaca slide.
2. Sentuhkan loop steril ke koloni organisme yang akan diuji dan ambil massa sel yang terlihat
3. Campurkan organisme dalam tetesan hidrogen peroksida.
4. Amati segera dan perhatikan ada tidaknya gelembung yang menggelegak.
5. Buang slide di tempat pembuangan yang disediakan..
Interpretasi: gelembung menggelegak menunjukkan hasil tes positif (+) dan kurang atau tidak menggelegak menunjukkan tes negatif (-)
Uji Coagulase latex
1. Letakkan 1 tetes dari Test Lateks ke salah satu lingkaran pada kaca slide atau kartu reaksi dan
setetes Control Lateks ke lingkaran lain.
2. Sentuhkan loop steril ke koloni organisme yang akan diuji dan ambil massa sel yang terlihat
. Campurkan sel-sel dalam setetes Test Latex
3. Ulangi Langkah 2 untuk Lateks Control
4. Goyang dan amati adanya Aglutinasi dari partikel lateks.dalam 20 detik
5. Buang kartu reaksi / kaca slide dalam wadah Biohazard.
Interpretasi:
Terjadi Aglutinasi Lateks pada tes dan tidak terjadi Aglutinasi Lateks dari Control dianggap sebagai uji coagulase positif (+) . Tidak ada Aglutinasi baik di dalam Tes Lateks atau Kontrol Lateks dianggap uji coagulase negatif (-) . Semua reaksi yang terjadi setelah 20 detik harus diabaikan. Jika terjadi Aglutinasi pada Lateks Kontrol menandakan Aglutinasi yang disebabkan oleh beberapa faktor selain enzim coagulase dan tes hasilnya tidak valid.
Uji Coagulase Plasma
| |||||||
 | |||||||
|
| ||||||
Manitol Salt Agar
1. Label tabung manitol agar garam dengan organisme yang akan diuji dan inisial anda.
2. Menggunakan loop steril untuk mengambil organisme yang akan diuji dan inokulasi ke
permukaan media garam manitol agar miring.
3. Inkubasi tabung 35 o C. selama minimal 18 jam.
4. Periksa pertumbuhan pada lereng dan amati perubahan warna dari merah ke kuning.
6. Buang tabung di tempat yang disediakan.
Interpretasi: Dua karakteristik yang berbeda dari organisme ditentukan dengan agar. Yang pertama adalah kemampuan organisme untuk menoleransi lingkungan garam yang tinggi. Bukti pertumbuhan pada area miring menunjukkan organisme dapat tumbuh di lingkungan garam yang tinggi.
Organisme yang dapat memfermentasi manitol gula asam menghasilkan produk akhir yang dapat
merubah pH indikator merah di media menjadi kuning. Setiap kuning di media dianggap sebagai tes positif untuk fermentasi manitol. Pada media ini dimungkinkan adanya organisme yang tumbuh
pada media namun tidak memfermentasi manitol.
Kerentanan Novobiocin
1. Membagi media nutrien agar plate menjadi tiga bagian.
2. Label tiap bagian dengan nama organisme yang akan diuji.
3. Gunakan loop steril untuk mengambil organisme dan inokulasikan ke media nutrien agar plate
dan buat goresan parit antara tiap bagian
4 Letakkan secara aseptik antibiotik novobiocin disc ke pusat inokulasi dari masing-masing bagian
. Dengan Lembut tekan disc sedemikian rupa sehingga permukaannya sejajar dengan permukaan
agar
5. Tutup plate dan masukkan inkubator selama minimal 18 jam (bagian tutup petridish di bawah)
6. Memeriksa plate untuk zona inhibisi pertumbuhan di sekitar disk antibiotik.
7. Menggunakan metrik penggaris, mengukur diameter zona penghambatan dan catat pengukuran
dalam milimeter (mm).
8. Membuang plate dalam wadah Biohazard.
Interpretasi: Sebuah zona inhibisi pertumbuhan dengan diameter 17 mm atau kurang dengan menunjukkan resistansi (R) untuk novobiocin. Jika zona lebih besar dari 17 mm organisme adalah
rentan (S) untuk novobiocin.
INSTRUKSI LABORATORIUM
Disediakan biakan: Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus saprophyticus
Siswa bekerja secara individu kecuali jika dinyatakan lain.
1. Membuat smear dan melakukan pewarnaan terhadap salah satu organisme yang disediakan.dan
memeriksa sediaan di bawah mikroskop
2. Melakukan uji katalase pada semua organisme.
3. Pilih salah satu dari tiga organisme dan melakukan tes coagulase. Biarkan anggota kelompok
yang lain untuk mengamati hasil Anda., sedangkan Anda mengamati hasil kelompok yang lain
4. Pilih salah satu dari tiga organisme dan inokulasi ke media manitol agar miring. Seperti dalam
ketentuan nomor 3, amati hasil dari ketiga organisme dari kelompok lain.
5. Uji setiap organisme untuk kerentanan novobiocin . Setiap orang harus menguji tiga organisme
semuanya
6. Mencatat semua hasil di Laboratorium
7. Ketika waktu mengizinkan, lakukan pewarnaan Gram di Langkah 1
Tabel Identifikasi Staphylococcus
Tes Staph. aureus Staph. epidermidis Staph. saprophyticus
Gram Stain
Katalase
Coagulase
Pertumbuhan manitol
fermentasi garam Manitol
Kerentanan Novobiocin
Semua jenis Staphylococcus adalah Gram ___________________
Dan positif untuk tes __________________________ .
Juga, semua spesies Staphylococcus mentolerir ___________________________
sebagaimana ditunjukkan oleh pertumbuhan mereka pada agar garam manitol .
Pengujian yang membedakan Staph. aureus dari spesies lain Staphylococcusadalah tes__________
Bagaimana Anda bisa membedakan Staph. epidermidis dari Staph. saprophyticus?
Identifikasi Gram Positif Cocci
Streptococcus
Pendahuluan
Anggota dari genus Streptococcus bertanggung jawab untuk penyakit serta menjadi bagian dari flora normal manusia. Beberapa penyakit yang disebabkan oleh Streptococcus antara lain: pneumonia, meningitis, radang amandel, endokarditis, luka api dan infeksi saluran kencing infeksi saluran. nafas Streptococcus spesies juga ditemukan biasanya di mulut dan di
permukaan kulit.
Spesies Streptokokus diklasifikasikan oleh dua metode utama: aktivitas hemolitik dan klasifikasi serologi Lancefield.
Berdasarkan klasifikasi Hemolytic Activity
Ketika tumbuh pada agar darah domba, streptokokus menampilkan salah satu dari tiga jenis
hemolisis dari sel-sel darah merah dalam agar.
Alfa hemolisis - media sel darah merah di dicerna sebagian menghasilkan warna hijau
pada media
Beta hemolisis - sel darah merah di media benar-benar dicerna menghasilkan zone jernih di
sekitar koloni.
. Gamma hemolisis - Tidak ada perubahan dalam agar. Sel darah merah tidak dipengaruhi
oleh organisme.
Hemolisis yang Diharapkan
Alfa beta gamma
Streptococcus pyogenes tak pernah selalu tak pernah
Streptococcus agalactiae tak pernah biasanya kadang-kadang
Streptococcus bovis kadang-kadang kadang-kadang biasanya
Streptococcus pneumoniae selalu tak pernah tak pernah
Enterococcus faecalis kadang-kadang kadang-kadang biasanya
Berdasarkan klasifikasi Lancefield Protein
Rebecca Lancefield, bekerja dengan berbagai spesies streptokokus, ditemukan protein yang unik dalam dinding sel organisme tertentu. Protein ini berlabel Grup A, Grup B, Grup C, dan seterusnya melalui Grup M. Saat ini ada tiga Grup Lancefield yang penting dalam medis, yaitu : Grup A, Grup B, dan Grup D.
Dari organisme yang digunakan dalam laboratorium ini berlaku korelasi berikut:
Group A Strep - Streptococcus pyogenes
Group B Strep - Streptococcus agalactiae
Group D Strep - Streptococcus bovis, Enterococcus (Streptococcus) faecalis
Streptococcus pneumoniae tidak memiliki protein dan tidak diklasifikasikan dalam salah satu kelompok Lancefield.
Streptokokus viridans adalah istilah yang digunakan untuk spesies Streptococcus alfa hemolitik Lancefield yang kekurangan protein.
Prinsip
Semua spesies Streptococcus cocci Gram positif. Beberapa hanya akan tumbuh pada media agar diperkaya , misalnya 5% agar darah domba.
Pada agar darah domba koloni yang biasanya abu-abu, punctiform, cembung, dan seluruh. Menampilkan berbagai jenis alfa, beta atau gamma hemolisis.
Tes biokimia penting termasuk katalase, kerentanan bacitracin, kerentanan optochin , pertumbuhan dalam kaldu garam tinggi, pola hemolisis dilihat dengan uji CAMP, dan kemampuan untuk menghidrolisis esculin.
Tes kerentanan bacitracin dan tes kerentanan optochin serupa dengan uji kerentanan novobiocin yang digunakan untuk identifikasi spesies Staphylococcus. Kertas filter disc diresapi dengan antibiotika yang sesuai ditempatkan pada permukaan agar. Zat tersebut berdifusi melalui agar. Organisme yang rentan terhadap antibiotika akan tidak tumbuh pada agar yang mengandung bahan antibiotik. Ukuran zona penghambatan pertumbuhan organisme menentukan kerentanan terhadap bahan kimia.
Faktor CAMP diffusable adalah protein yang dihasilkan oleh spesies tertentu Streptococcus. Faktor ini akan bereaksi dengan menghasilkan toksin beta oleh Staphylococcus aureus akan dengan cepat melisiskan sel darah merah domba. Bila Streptococcus memproduksi CAMP akan tumbuh dekat racun beta yang pasti diproduksi oleh strain Staphylococcus aureus dan menghasilkan sinergi membentuk pola hemolitik khas
Beberapa organisme dapat mentoleransi konsentrasi garam NaCl 6,5%. Dan akan tumbuh dalam kaldu garam tinggi.
Media Esculin empedu agar berisi empedu yang menghambat pertumbuhan dari banyak organisme. Beberapa organisme dapat menghidrolisis esculin menjadi esculetin dan dekstrosa. Esculetin akan bereaksi dengan besi sitrat di media untuk menghasilkan produk berwatna cokelat hitam.
Prosedur
Bacitracin Kerentanan
1. Membagi plate agar darah domba menjadi empat kuadran.
2. Label sebuah kuadran dengan nama organisme yang akan diuji.
3. Menggunakan loop steril secara aseptik untuk mentransfer organisme tes ke plate dan buat parit
antara tiap kuadran .
4. Mentransfer secara aseptik bacitracin disc (A disc) ke tengah kuadran.
gunakan penjepit steril untuk mengatur posisi disc. Tekan lembut disc ke permukaan agar-agar
tetapi tidak membenamkan disc dalam agar.
5. Tutup plate dan masukkan dalam inkubator selama minimal 18 jam.
6. Memeriksa piring untuk zona inhibisi pertumbuhan di sekitar cakram. Bila sudah selesai, buang
piring dalam wadah Biohazard.
Interpretasi: Setiap zona inhibisi pertumbuhan dianggap positif (+) untuk tes ini.. Tes ini harus dilakukan hanya pada organisme yang menampilkan hemolisis beta.
Kerentanan Optochin
1. Membagi plate agar darah domba menjadi empat kuadran.
2. Label sebuah kuadran dengan nama organisme yang akan diuji.
3. Menggunakan loop steril secara aseptik untuk mentransfer organisme tes ke plate dan buat parit di
antara kuadran. .
4. Mentransfer optochin disc (P disc) secara aseptik ke tengah kuadran.. Gunakan penjepit steril
untuk mengatur posisi disc. Tekan lembut disc ke permukaan agar-agar tetapi tidak
membenamkan disc dalam agar.
5. Tutup plare dan masukkan ke dalam inkubator selama minimal 18 jam.
6. Memeriksa plate untuk zona inhibisi pertumbuhan di sekitar cakram. Menggunakan metrik
penggaris, mengukur diameter zona penghambatan dan mencatat pengukuran dalam milimeter
(mm). Apabila selesai buang piring di wadah Biohazard
Interpretasi: Sebuah zona hambatan pertumbuhan 15-30 mm dianggap uji.positif (+) Zona ukuran kurang dari 15 mm dianggap negatif (-) untuk tes ini. Pengujian ini harus dilakukan hanya pada organisme yang menampilkan alfa hemolisis.
CAMP Test
Tes CAMP untuk identifikasi b-hemolitik Streptococcus algalactie (group B)
" fenomena litik” antara Staphylococcus aureus dan Streptococcus agalactiae (kelompok B), menjadi dasar bagi tes CAMP, Koloni Streptococcus agalactie dikelilingi oleh zona hemolisis total ketika mereka tumbuh di dekat koloni Staphylococcus b-hemolitik. Adapun Streptococcus pyogenes (non-group B) gagal menunjukkan peningkatan hemolisis saat tumbuh di dekat koloni Staphylococcus b-hemolitik
CAMP test menunjukkan zone hemolisis total Hasil uji CAMP positip dari Streptococcus Hasil uji CAMP Negatip pada
berbentuk panah (hasil positif) dari Streptococcus agalactie (group B) saat diuji terhadap pada Streptococcus pyogenes (group A)
agalactiae(kelompok B)dan hasil negatif Streptococcus Staphylococcus aureus. Tampak zone hemolisis saat diuji terhadap Staphylococcus
pyogenes (grup A) saat diuji terhadap Staphylococcus total berbentuk panah pada media Blood Agar aureus. Tidak tampak zone hemolisis
aureus plate (BAP). berbentuk panah
1. Media plate agar darah domba yang telah disiapkan untuk tes CAMP diinokulasi dengan bakteri
Staphylococcus aureus membentuk sebuah garis di tengah plate.
2.Streak dengan Streptococcus yang akan diuji CAMP secara tegak lurus dengan garis streak dari
S.aureus. Label salah satu garis pada plate CAMP dengan organisme yang akan diuji.
Caranya, Gunakan loop steril unruk mengambil organisme yang akan diuji, Buat satu garis inokulum dan bergerak dari tepi luar plate CAMP menuju streak Staph. Jangan biarkan organisme tes untuk secara langsung menyentuh garis . streak dari Staph. .
3. Tutup plate dan masukkan ke inkubator selama minimal 18 jam.
4.. Amati plate, lihat fenomena mata anak panah yang berbeda pola hemolisis pada area dimana
organisme tes dan Staph. hampir bersentuhan.
5.. Membuang piring dalam wadah Biohazard.
Interpretasi: Adanya pola hemolisis seperti mata anak panah dianggap positif (+) untuk tes ini.
Tidak ada hemolisis atau pola hemolisis tidak jelas dianggap negatif (-) untuk tes ini.
Tes ini harus dilakukan hanya pada organisme yang menampilkan beta atau gamma hemolisis.
Bile Esculin
1. Label media esculin empedu agar miring dengan organisme yang akan diuji dan inisial anda.
2. Menggunakan loop steril untuk mentransfer organisme yang akan diuji ke permukaan empedu
esculin agar miring .
3. Inkubasi tabung selama minimal 18 jam.
4. Memeriksa tabung untuk mengetahui warna yang dari media.
5. Buang ke wadah biohazard bila sudah selesai
Interpretasi: Terjadi warna yang menghitam dari agar dianggap positif (+) untuk tes ini. Tidak Ada perubahan dalam warna agar dianggap negatif (-) untuk tes ini. Tes ini harus dilakukan terhadap semua organisme yang dicurigai streptokokus.
| ||||||||||||
| | ||||||||||||
|
| |||||||||||
Garam tinggi
1. Label tabung kaldu yang mengandung garam tinggi dengan organisme yang akan diuji dan
inisial anda.
2. Menggunakan loop steril untuk mentrasfer organisme yang akan diuji ke media kaldu garam
3. Menetaskan tabung selama minimal 18 jam.
4. Memeriksa tabung untuk membuktikan adanya pertumbuhan (kekeruhan). Bandingkan dengan
tabung kaldu gatam yang steril (uninoculated). Jangan menggoyang tabung sebelum Anda
memeriksa mereka.
5. Bila sudah selesai, buang tabung ke wadah biohazard yang disediakan.
Interpretasi: Organisme yang dapat mentolerir lingkungan garam yang tinggi (6,5% NaCl) akan
tumbuh dalam kaldu ini dan menyebabkan kaldu menjadi keruh . Kekeruhan dianggap positif (+) untuk tes ini. Organisme yang tidak dapat mentoleransi lingkungan garam yang tinggi akan tidak tumbuh dan kaldu akan tetap jernih, maka dianggap tes negatif (-) Tes ini harus dilakukan pada semua organisme yang dicurigai streptokokus.
INSTRUKSI LABORATORIUM
Disediakan kultur : Streptococcus pyogenes
Streptococcus agalactiae
Streptococcus pneumoniae
Enterococcus (Streptococcus) faecalis
Streptococcus bovis
Siswa bekerja secara individu kecuali jika dinyatakan lain.
1. Membuat pewarnaan terhadap salah satu organisme yang disediakan
2. Melakukan uji katalase pada semua organisme dan mencatat hasil dalam Lembar
Kerja Laboratorium
3. Memeriksa semua biakan untuk hemolisis dan catat pengamatan Anda pada
Lembar Kerja Laboratorium
4. Lihat Worksheet Laboratorium Anda dan pada semua organisme beta hemolitik dilakukan Uji
Kerentanan Bacitracin
5. Lihat Worksheet Laboratorium Anda dan pada semua organisme alfa hemolitik dilakukan Uji
Kerentanan Optochin
6. Lihat Worksheet Laboratorium Anda dan pada semua organisme beta dan gamma hemolitik
dilakukan Uji CAMP .
Dalam kelompok kerja laboratorium untuk mendapatkan semua yang diperlukan untuk pengujian
organisme, pastikan setiap anggota kelompok satu set tes. Organisme dapat digunakan lebih
dari sekali dalam grup Anda jika perlu.
7. Bekerja dalam kelompok-kelompok, melakukan uji empedu esculin agar miring pada semua
organisme. Setiap anggota kelompok harus melakukan setidaknya satu tes.
8. Bekerja dalam kelompok, melakukan Uji kaldu garam yang tinggi pada semua organisme.Setiap
anggota kelompok harus melakukan setidaknya satu tes.
9. Setelah inkubasi, periksa semua hasil tes dan catat di Lembar Kerja Laboratorium
10. Apabila waktu mengizinkan, lakukan pewarnaan Gram di Langkah 1
IDENTIFIKASI STREPTOCOCCUS
Test * Strep. pyogenes Strep. agalactiae Strep. pneumoniae Enterococcus faecalis Strep. bovis
Gram Stain
Katalase
Hemolisis
Bacitracin
Optochin
CAMP Test
Empedu Esculin
Garam tinggi
* Jika tes ini tidak dilakukan pada organisme karena ini adalah tes yang tidak tepat untuk organisme itu tandai kotak hasil dengan X. besar
Karakteristik apa yang membedakan antara Staphylococcus dan Streptococcus ?
Tes Apa yang digunakan untuk membedakan Staphylococcus dari Streptococcus?
Organisme adalah GPC, katalase negatif, dan alfa hemolitik. Buat daftar tes yang sesuai untuk identifikasi organisme ini.
Organisme adalah GPC, katalase negatif, dan beta hemolitik. Buat daftar tes yang sesuai untuk identifikasi organisme ini.
Organisme adalah GPC, katalase negatif, dan gamma hemolitik. Buat daftar tes yang sesuai untuk identifikasi organisme ini.
Setelah Anda tahu suatu organisme adalah GPC, tes apa yang harus Anda lakukan selanjutnya?
trima kasih..artikelnya lengkap
BalasHapus